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淋巴增殖性疾病是一组病理形态、免疫表型、临床特征高度异质性的疾病。本文旨在评价流式细胞免疫分型联合聚合酶链反应(PCR)检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断中的应用价值。方法：分离79例拟诊淋巴增殖性疾病患者的新鲜病理标本(淋巴结、脾脏、胃活检组织和肝穿组织)，流式细胞术分析细胞的免疫表型特征；同时采用BIOMED-2多重PCR分析组织的抗原受体基因重排状况及其克隆来源；并与病理诊断及免疫组织...
A型肉毒梭菌atx基因TaqMan探针荧光定量PCR检测
肉毒梭菌 TaqMan探针 atx基因 荧光定量PCR
2014/8/6
采用TaqMan探针荧光定量PCR方法对A型肉毒梭菌atx基因进行检测。方法 以atx基因为靶基因,设计引物和TaqMan探针,优化反应条件,制作定量标准曲线,进行灵敏度、特异性和重复性验证,建立A型肉毒梭菌TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果 构建质粒pUC57-△atx,标准曲线在103～103拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.997,灵敏度达到22个拷贝数,比普通PCR提高约10...
建立敏感、特异、定量Real-time PCR方法,用于恙虫病东方体的检测。方法 根据恙虫病东方体56 kD外膜蛋白基因序列设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果 建立的TaqMan-MGB探针具有良好的特异性,建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.99),灵敏性评估发现每个20 μlPCR反应管中只要有26个拷贝的目的基因即可被检测到,...
Detection of Drug Resistance Gene in Cutaneous Leishmaniasis by PCR in Some Endemic Areas of Iran
Cutaneous Leishmaniasis Drug resistance PCR Iran
2015/9/24
Background: Cutaneous leishmaniasis is still a health problem in many rural and urban regions of Iran and drug resistance has emerged as a major impediment in the treatment of leishmaniasis. This stud...
Sequence Analysis of Lysozyme C from the Scorpion Mesobuthus Eupeus Venom Glands Using Semi- Nested RT-PCR
C-type lysozyme Scorpion Mesobuthus eupeus Antimicrobial protein
2015/9/24
Background: Lysozyme is an antimicrobial protein widely distributed among eukaryotes and prokaryotes and take part in protecting microbial infection. Here, we amplified cDNA of MesoLys-C, a c-type lys...
以番茄(Solanum lycopersicum L. cv. Micro-Tom)叶片为试材, 建立了一种简便快速制备叶片基因组DNA的方法。2~20 mm2的叶片即可满足制备要求, 制备过程只需一种提取试剂、只涉及1次移液和1次离心操作, 不涉及沉淀。确定了所制备的DNA用于实时荧光定量PCR的合适用量为0.1~0.2 mL (反应总体积为12.5 mL), 发现过量模板的使用可降低PCR效率...
半定量RT PCR法测定TRAIL、survivin在胃癌组织中
半定量 凋亡诱导配体 肿瘤
2011/9/19
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis facterrelated apoptosisinducing ligand,TRAIL)是TNF超家族中的成员，属Ⅱ型跨膜蛋白，因其具有大量、快速地诱导转化细胞、肿瘤细胞及病毒感染细胞发生凋亡，而对大多数组织细胞没有毒性的特性[1]，使其在肿瘤的治疗中具有较重要的研究价值。Survivin是凋亡蛋白抑制因子家族(inhibitor...
KPC型碳青霉烯酶基因荧光定量PCR快速鉴定
荧光定量PCR KPC型碳青霉烯酶基因 鉴定
2014/7/17
建立一种准确地鉴定肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因的方法。方法 比对11种KPC型碳青霉烯酶基因,在保守区设计引物和探针,优化PCR反应体系,评价特异性、灵敏度和重复性,对样本分离株进行检测,通过测序、药敏实验等验证该方法的正确性。结果 该方法可准确、特异地鉴定KPC型碳青霉烯酶基因,其他不携带该基因的菌株均无阳性结果;阳性质粒、纯培养细菌和模拟样本的灵敏度分别为10 copies/μL、10...
优化甲型流感病毒核酸提取步骤和RTPCR反应液组成，提高RTPCR荧光检测敏感性、缩短报告时间。方法 优化QIAamp Viral RNA mini Kit核酸提取操作步骤，对核酸裂解液处理后的样本进行两次层析柱过滤，核酸洗脱由试剂盒的室温环境改为72 ℃温育5 min后离心洗脱，荧光RTPCR反应液采用SuperScript Ⅲ Platinum qRTPCR系统优化，RTPCR扩增程...
巢式PCR法在疟疾检测及虫种鉴别中的应用
疟疾 巢式PCR 小亚单位核糖体核糖核酸
2012/6/25
根据疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸（SSU rRNA）基因序列设计疟原虫通用型和种特异性的引物，对60份血样进行巢式PCR检测及虫种鉴定，并与血样的吉氏染色镜检结果进行比较。巢式PCR检出40份疟原虫阳性血样，其中22份为恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）阳性、13份为间日疟原虫（P. vivax）阳性、3份为恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染、1份为卵形疟原虫阳性（P. oval...
Sau-PCR分子分型技术及应用
Sau-PCR 分子分型 食源性致病菌 应用
2015/12/9
Sau-PCR是2005年新发展的一种限制性内切酶(Sau3AI)酶切和PCR扩增相结合的分子分型技术,该技术是在扩增片段长度多态性(AFLP)和随机扩增多态性DNA片段(RAPD)方法的基础上建立起来的,具有重复性好、简单、快捷等优点,近年来被逐步应用于食品污染和院内感染的分子流行病学调查。本文对Sau-PCR的原理、技术特点及其应用情况等进行了介绍。
为评估定量荧光PCR (QF-PCR)方法在男性不育遗传学诊断中的应用价值, 文章对78例非梗阻性男性不育患者, 采用精液常规检测精子情况, 并检测患者性激素水平; 采用QF-PCR方法对患者性染色体多态性STR位点及特异性位点进行检测; 采用常规染色体G显带方法进行核型分析; PCR检测AZF微缺失。结果显示78例非梗阻性男性不育患者中发现无精子症患者18例, 少精子症患者20例, 总检出率为4...
应用FTA/PCR检测粪便中隐孢子虫的实验研究
隐孢子虫 巢式PCR 检测
2013/11/27
建立用FTA/PCR检测粪便中隐孢子虫的技术，并与常用的商业化的粪便DNA抽提试剂盒进行比较。方法 选择经病原学检测已经确诊的隐孢子虫阳性和阴性粪便，分别采用FTA卡和商业化DNA抽提试剂盒抽提粪便样本中DNA，进行巢式PCR扩增，对PCR阳性产物进行测序并利用BLAST在NCBI上与GenBank数据库进行比对，做同源性分析，确定序列的来源。结果 应用商业化DNA抽提试剂盒抽提DNA，无论是否反...
急性呼吸系统疾病暴发疫情多重巢式PCR检测分析
多重巢式PCR技术 肺炎衣原体 B型流感嗜血杆菌(HIB)
2014/8/11
对3起不明原因的聚集性急性呼吸系统疾病暴发疫情的标本进行多重巢式PCR检测,及时筛查SARS病毒、高致病性人禽流感H5N1亚型病毒并检测其他亚型流感病毒、副流感病毒、支原体、肺炎衣原体等病原体,探讨该方法在聚集性急性呼吸系统疾病调查中的应用意义。方法 采用多重巢式PCR方法对3起疫情的咽拭标本进行可引起急性呼吸系统疾病的23种病原体进行筛查。结果 医院甲不明原因肺炎聚集性病例9例,对9例咽拭标本进...