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HCV感染实验探讨人胎盘滋养层细胞分子生物性及侵袭力
分子生物学 金属蛋白酶2 金属蛋白酶9 体外实验
2014/7/11
探讨持续感染丙型肝炎病毒（HCV）对体外培养人胎盘合体滋养层细胞分子生物学性状及其金属蛋白酶（MMP）2、MMP9合成及分泌的影响。方法 分别采用Matrigel人工重建基底膜侵袭实验、MTT法细胞黏附实验、细胞移动实验，研究HCV RNA阳性患者血清感染的体外培养人胎盘滋养层细胞(感染组)侵袭能力以及侵袭相关的黏附、移动能力的改变；检测培养上清中人绒毛膜促性腺激素（HCG）浓度以评估感染对细...
目的: 调查HCV肝炎、肝硬化组织核心蛋白、突变P53、Mdm2、P21waf1的表达以及他们间的相关性，探讨HCV核心蛋白对突变P53、Mdm2、P21waf1的表达作用及意义.方法: 收集HCV表达阳性的肝炎、肝硬化组织23例，采用免疫组织化学EnVision法检测HCV感染的肝炎、肝硬化组织中核心蛋白、突变P53、Mdm2、P21waf1的表达，用统计学方法及临床联系分析他们之间的关系.结果...
荧光定量PCR与逆转录PCR检测HCV RNA的比较分析
荧光定量PCR 逆转录PCR HCV RNA
2009/8/3
目的: 用荧光定量PCR(FQ-PCR)和逆转录PCR(RT-PCR)法检测抗-HCV阳性血清中的HCV RNA，探讨两种方法检测结果的临床意义. 方法: 抗-HCV阳性血清样本1062份，其中481份用RT-PCR法检测，465份用FQ-PCR法检测，另有116份同时用两种PCR法检测. 结果: RT-PCR法检测HCV RNA的阳性率为49.90%(240/481)，FQ-PCR法的阳性率为6...
HCV核蛋白羧基端信号肽基因缺失突变体的构建、鉴定和真核表达
HCV核蛋白羧基端信号肽 基因缺失突变体 鉴定 真核表达
2009/7/31
目的: 构建羧基末端缺失核蛋白的真核表达载体并在小鼠肥大细胞瘤细胞株P815细胞中表达. 方法: 用RT-PCR方法从西安地区丙型肝炎患者血清中扩增HCV C区及部分E1区基因并进行克隆、测序，以此为模板扩增羧基末端缺失突变核蛋白基因片段(C507)，将其定向克隆入真核表达载体pCI-neo中并转染P815细胞，经间接免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜检测细胞中突变核蛋白(P169)的表达. 结果: ...
实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义
实时荧光定量检测 HCV RNA含量 临床意义
2009/7/30
目的: 建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法，初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性．方法: HCV抗体阳性样本80例，包括慢性肝炎(CH)39例，肝硬化(LC)23例，肝癌(HCC)18例，献血员样本40例为正常对照．在HCV基因组5’非编码区(5’UTR)设计特异性引物和一对杂交探针，构建相应基因片段载体，体外转录RNA作为标准品，根据其建立的...
酵母双杂交技术筛选HCV F蛋白结合蛋白基因
酵母双杂交技术 HCV F蛋白 蛋白基因
2009/7/29
目的: 丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白是一个新的HCV基因产物，其生物学特性目前尚不明确，我们应用酵母双杂交系统Ⅲ技术进行筛选F蛋白结合蛋白基因.方法: 构建F蛋白诱饵质粒，转化酵母AH109后与含肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合，在涂有X-gamma-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长. 挑选蓝色克隆，提取此酵母克隆的质粒，转化大肠杆菌提取质粒D...
实时荧光定量PCR检测血清中HCV-RNA
实时荧光定量 PCR检测 血清 HCV-RNA
2009/7/28
目的: 通过实时荧光定量PCR(FQ-PCR)与逆转录PCR(RT-PCR)两种方法检测血清HCV-RNA的结果比较，评价FQ-PCR法的临床应用价值.方法: 样本为经ELISA法筛选抗HCV阳性血清401份，其中221份采用实时荧光定量PCR法检测，180份采用RT-PCR法检测.结果: FQ-PCR法检测HCV-RNA，阳性率(≥102拷贝/mL)68.3% (151/221)，定量范围在10...
HCBP6对HCV核心蛋白反式激活作用的影响
HCBP6 HCV核心蛋白 反式激活作用
2009/7/27
目的: 研究HCBP6蛋白在细胞内表达时，是否通过蛋白-蛋白之间的相互作用，对HCV核心蛋白的反式激活作用产生影响.方法: 利用常规的分子生物学技术分别构建HCBP6蛋白和丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的真核表达载体. 酶联免疫黏附法enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测CAT的表达水平，间接测定HCV核心蛋白对于SV40病毒即刻早期启动子的反式激活活...
抗HCV树突状细胞疫苗的制备及功能研究
抗HCV树突状细胞疫苗 制备 功能研究
2009/7/23
树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞，在免疫反应中起着举足轻重的作用，因此备受重视. 1990年以来，人们在体外诱导扩增DC成功之后，克服了以往由于DC在组织中含量很少、难以获取的困难，使DC研究取得了许多突破性的进展，为人们探索新的疾病防治手段开辟了新的天地. 以下从树突状细胞的特性、体外诱生及以DC为基础的治疗性疫苗在抗HCV感染中的作用等三个...
目的: 用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白结合蛋白的编码基因.方法: 用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS3基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，增菌后提出质粒，转化入大肠杆菌(DH5alpha)，提取质粒并测序，进行生物信...
HCV-Fc融合基因疫苗真核表达载体的构建及表达
HCV-Fc融合基因疫苗 真核表达载体 构建 表达
2009/7/23
目的:构建能表达HCV C-Fc融合基因的真核表达载体，为进一步修饰和转染树突状细胞，制备能高效表达HCV C和Fc基因的树突状细胞疫苗做准备.方法:用分别含有KpnⅠ和XholⅠ酶切位点的HCV C区基因上、下游引物，以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板，通过PCR扩增获得HCV C区基因片段回收后，以KpnⅠ和XholⅠ双酶切，定向插入到含IgG1 Fc基因的质...
目的:研究核糖体内部进入位点(internal ribosome entry site,IRES)特异性抑制性RNA (inhibitor RNA,IRNA)细胞内对丙型肝炎病毒(HCV) IRES介导蛋白翻译的抑制作用.方法:体外应用脂质体细胞转染法,将IRNA及其突变体mIRNA真核表达载体pcRz-IRNA/pcRz-mIRNA转染人肝癌细胞株（HHCC），经G418筛选4 wk后建立IRN...