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日本血吸虫核糖体蛋白SjRibosomal_L18a及其B细胞表位的筛选和评价
日本血吸虫 B细胞表位 核糖体蛋白 虫期特异性
2013/11/11
筛选获得日本血吸虫（Schistosoma japonicum）核糖体蛋白（SjRibosomal_L18a）编码基因，预测其B细胞表位。克隆、表达重组蛋白SjRibosomal_L18a，并比较分析其与合成的B细胞表位的潜在诊断价值。 方法 利用B细胞表位预测软件筛选日本血吸虫蛋白质序列，获取函数打分值较高且抗原表位片段多的免疫原性蛋白，合成B细胞表位片段。生物信息学方法分析免疫原性蛋白基因...
日本血吸虫脱尾童虫表膜结合短肽的筛选与鉴定
日本血吸虫 表膜 噬菌体展示技术
2013/3/11
筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫（Schistosoma japonicum）脱尾童虫表膜特异性结合而不与尾蚴表膜结合的短肽并鉴定。 方法 利用M13噬菌体十二肽库，经体外逆向差异筛选日本血吸虫尾蚴和脱尾活童虫，从第3轮回收的结合噬菌体中随机挑取15个克隆进行测序。获取目标噬菌体后，采用ELISA法、洗脱回收率实验（以M13KE为阴性对照）和免疫组织化学法检测日本血吸虫脱尾童虫、尾蚴与噬菌斑克...
酵母双杂交筛选与弓形虫毒力因子ROP18 相互作用的宿主蛋白
弓形虫 ROP1825-251aa 酵母双杂交 相互作用 宿主蛋白
2013/3/11
利用酵母双杂交方法，筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白。 方法 RT-PCR扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因片段，扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中，将重组质粒导入酵母AH109菌株中，检测诱饵载体有无毒性和自激活作用，利用酵母双杂交系统从人胚胎脑cDNA文库中筛选与ROP18相互作用的宿主蛋白。 结果 构建了诱饵载体pGBKT7?鄄ROP18，ROP...
细粒棘球蚴cDNA文库的构建和免疫筛选
细粒棘球蚴 原头节 cDNA文库 免疫筛选
2013/11/25
目的构建细粒棘球蚴原头节的λ ZAP Ⅱ cDNA文库，并对构建的文库进行免疫筛选。 方法采集感染细粒棘球蚴的绵羊育囊中的原头节，用Trizol试剂抽提总RNA，用mRNA纯化试剂盒纯化mRNA作为模板合成cDNA，并对其进行末端平端化、EcoR Ⅰ接头连接和磷酸化及Xho Ⅰ酶切，然后应用Sepharose CL2B分离柱对其进行分级分离，收集大于500 bp的cDNA片段，使用Gigapac...
寻找可用于日本血吸虫病诊断或疗效考核的抗原分子。 方法 在安徽省安庆市某现场，采集经粪检（Kato-Katz法，2送6检）日本血吸虫卵阳性的10份患者血样，患者年龄13～64岁，EPG为4～172；并收集该10例患者经吡喹酮（60 mg/kg×2 d）治疗6个月后的血样，将吡喹酮治疗前和治疗后的血清各10份分别混合，分别筛选虫卵cDNA文库，将所获阳性克隆分类，测定阳性克隆插入片段的DNA序列，经...
广州管圆线虫cDNA文库基因筛选的研究进展
广州管圆线虫 cDNA文库 筛选
2013/11/27
cDNA文库因不含内含子而便于克隆和大量扩增，利用多种筛选方法并结合生物信息学软件获得阳性克隆，对于从分子水平上深入研究广州管圆线虫病的致病机制及诊断方法具有重要意义。该文综述了广州管圆线虫各期cDNA文库特异基因筛选的研究进展。
目的 筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫（Schistosoma japonicum）童虫表膜特异性结合的多肽并鉴定。 方法 利用噬菌体十二肽库与日本血吸虫活童虫靶分子之间的亲和力结合，经3轮吸附-洗脱-扩增，从末次回收的结合噬菌体中随机挑取20个克隆进行测序。根据测序结果，选取出现次数最多的噬菌体克隆作为目标噬菌体，免疫组化检测目的噬菌体，并回输到已感染日本血吸虫的小鼠体内，2.5 h后处死小鼠，...
目的 对猪囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析。 方法 四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者，口服槟榔-南瓜子驱虫，收集、制备虫卵悬液（8万个/ml）。将6头20 d龄三元杂交乳猪均分实验组和空白对照组，实验组每猪灌胃虫卵悬液1 ml。40 d后，分别制备实验组心脏血混合血清及对照组心脏血混合血清；收集、制备实验组猪囊尾蚴蛋白，进行双向电泳（2-DE）分析。将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜...
东方巴贝虫cDNA文库的构建与免疫学筛选
东方巴贝虫 cDNA文库 免疫学筛选 序列分析
2009/7/21
目的 构建东方巴贝虫（Babesia orientalis）cDNA文库, 从中筛选免疫学阳性的克隆。 方法 用东方巴贝虫感染牛, 提纯红细胞内虫体的总RNA, 反转录合成cDNA, PCR扩增后将其连接于噬菌体载体（λTriplEx2）, 通过体外包装, 建成东方巴贝虫cDNA文库, 并进行扩增。用兔抗东方巴贝虫的血清筛选cDNA文库, 阳性克隆经大肠埃希菌BM25.8自身环化酶将噬菌体重组子λ...
微小隐孢子虫子孢子与宿主黏附相关蛋白的筛选
微小隐孢子虫子 孢子 宿主黏附相关蛋白
2009/5/19
利用人结肠癌细胞（Caco-2 cell）对微小隐孢子虫子孢子噬菌体展示文库进行筛选。对筛选得到的噬菌体进行克隆及测序分析，共获得5个特异的基因片段，其中1个为已知的编码微小隐孢子虫重要的侵入和黏附相关蛋白CP2，另外4个编码功能未知的蛋白。筛选得到的蛋白可能参与子孢子与宿主细胞的黏附过程。
目的：获得日本血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍ，Ｓｊ）尾蚴６６～６８ｋＤ抗原的编码基因，为日本
血吸虫疫苗和诊断研究提供材料。方法：以Ｓｊ尾蚴６６～６８ｋＤ抗原免疫家兔获得的单特异性血清为探
针，对Ｓｊ尾蚴ｃＤＮＡ文库进行免疫筛选，将所获阳性克隆的插入片断进行ＰＣＲ扩增、琼脂糖电泳初步鉴
定，并挑选出４个强阳性克隆进行测序，通过互联网ＮＣＢＩ／ＢＬＡＳＴ进行核苷酸序列分析。结...
长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的构建及免疫学筛选
长角血蜱 雌蜱 cDNA表达文库 免疫学筛选
2009/4/8
目的 构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库，筛选长角血蜱功能性抗原基因。 方法 在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA，进而纯化mRNA，以寡脱氧胸腺核苷酸［oligo（dT）］为引物合成双链cDNA，并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cDNA分子定向克隆至具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体。用噬菌体包装蛋白对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体，转化大...
用日本血吸虫感染14 d的小鼠血清免疫筛选日本血吸虫童虫cDNA文库，将获得的7个阳性克隆进行核苷酸序列同源性分析，结果显示其中一个克隆所测序列与日本血吸虫HSP70有很高的同源性（分值score=650），另有2个克隆所测序列分别与已报道的日本血吸虫FABP（score=229）和含锌指结构的CDGSH型蛋白样蛋白（score=246）明显同源，其余4个未找到已知的同源序列，为新基因。4个新基因...
大鼠感染血清免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库
弓形虫 cDNA文库 免疫筛选 大鼠
2009/2/26
目的为弓形虫病疫苗的研制提供新的抗原分子。方法用弓形虫RH株速殖子感染大鼠,分离其血清作为探针筛选弓形虫cDNA文库,对阳性克隆的插入片段分别进行PCR扩增及DNA序列测定。结果从cDNA文库4×105~5个噬菌斑中筛选出13个阳性克隆,其插入片段大小分别为0.45～2.4kb。对L1、L2、L4和L5四个克隆进行测序,将所得序列查询基因库,结果,克隆L2与弓形虫P24主要抗原基因序列相同,L4与...
白纹伊蚊蜕皮激素拮抗剂筛选酵母模型的建立
白纹伊蚊 蜕皮激素受体 超螺旋蛋白 蜕皮激素受体响应元件 虫酰肼 蜕皮激素拮抗物
2009/2/25
目的 在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统, 建立高通量杀虫剂筛选模型，用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。 方法 人工合成果蝇蜕皮激素响应元件（EcRE）5次重复的序列, 与果蝇热激蛋白基因启动子（pHSP27）序列连接, 以绿色荧光蛋白（GFP）报告基因, 将EcRE-pHSP27-GFP片段亚克隆入pPIC3.5k, 整合入毕赤酵母染色体构建阴性酵母A。人工合成白纹伊蚊蜕皮激素受体(...